Amniocentesi e Analisi del Sangue: La Guida Completa alla Diagnosi Prenatale Sicura e Precisa

Circa il 3% dei neonati è affetto da anomalie cromosomiche, difetti genetici o malformazioni congenite. In molti casi, queste malattie possono essere prevenute o diagnosticate grazie alle indagini prenatali.

Patologie Cromosomiche

Le patologie cromosomiche rappresentano una parte importante dei difetti congeniti. Possono riguardare il numero complessivo dei cromosomi (trisomie, monosomie, poliploidie) o la loro struttura (traslocazioni, delezioni, inversioni, ecc.). La forma più comune nell’uomo è la Trisomia 21 (mongolismo o sindrome di Down) che compare in un caso su 700 bambini nati vivi.

È molto importante che la coppia venga informata correttamente su quali esami oggi sono disponibili, a quali epoche di gravidanza vengono eseguiti, come si svolgono, se sono o no pericolosi, e che tipo di problemi fetali permettono di evidenziare.

Esami Prenatali: Non Invasivi vs. Invasivi

Si possono distinguere due categorie di esami: quelli non invasivi che non comportano nessun rischio per il nascituro, e quelli invasivi che invece comportano un minimo di rischio.

Test Non Invasivi

Test del DNA fetale
Test Combinato

Test DNA Fetale

Il Test DNA Fetale è un nuovo esame di diagnosi prenatale che consiste in un semplice prelievo di sangue alla futura mamma. Il test va ad analizzare la quantità di Dna fetale presente nel sangue materno. Si sa da una decina di anni che nel sangue materno sono presenti cellule del feto, o meglio della placenta, che contiene il medesimo corredo genetico del feto.

Da circa un anno e mezzo, grazie a sofisticati macchinari, si è riusciti ad isolare questo Dna (in modo da non confonderlo con quello materno) e replicarlo in laboratorio, fino ad ottenerne una quantità sufficiente per analizzarlo. L’esame offre un’attendibilità superiore al 99% ma per ora si può eseguire solo privatamente e il costo si avvicina a 800,00€ euro.

Il test del dna fetale nel sangue materno si esegue dalla 12° alla 14°settimana: non prima, perché la quantità di dna presente nel sangue potrebbe non essere sufficiente per l’indagine; non dopo, altrimenti si perde il vantaggio della precocità dell’indagine.

Permette di analizzare il Dna fetale per scoprire le tre patologie cromosomiche più frequenti, e cioè la sindrome di Down (o trisomia 21), la sindrome di Edwards (trisomia 18) e di Palau (trisomia 13). I falsi positivi sono molto rari, inferiori all’1%. Tuttavia, poiché si tratta di un esame molto recente, le società scientifiche raccomandano di confermare un eventuale esito positivo (quindi patologico) sottoponendosi a un esame tradizionale, cioè l’amniocentesi o la villocentesi, prima di valutare una possibile interruzione di gravidanza.

Il test del Dna da sangue materno è indicato per le future mamme che non presentano fattori di rischio e desiderano sapere se il feto è affetto da una delle tre trisomie più diffuse senza esporsi al rischio di aborto dato da villocentesi ed amniocentesi. Se invece la futura mamma già ha fattori di rischio, ad esempio malattie ereditarie o un precedente figlio affetto da sindrome di Down o altra patologia cromosomica, oppure ha effettuato un test di screening (come il test combinato del primo trimestre) che ha evidenziato un rischio aumentato di anomalie fetali, allora la coppia dovrà valutare se è più opportuno rivolgersi direttamente a un esame invasivo che permette indagini genetiche più estese.

Si tenga presente infine che il test si può eseguire solo su feti singoli, mentre non è attendibile per i gemelli, poiché, pur identificando una eventuale trisomia, non è in grado di attribuire il dato patologico al gemello corrispondente. Anche se si tratta di un esame molto preciso, il test del Dna a oggi non sostituisce villocentesi e amniocentesi, che sono molto più completi perché tramite il prelievo dei villi coriali o del liquido amniotico si riesce ad analizzare una quantità molto maggiore di Dna e ad indagare l’assetto cromosomico completo, più altre eventuali anomalie che, con le attuali tecnologie, non sono indagabili con il solo prelievo di sangue materno.

Test Combinato

Il test combinato del primo trimestre è un test di screening composto da due distinti esami: l’ecografia della translucenza nucale e un prelievo di sangue materno, chiamato duo-test o bi-test. Si esegue nel primo trimestre, esattamente tra la 11ma e la 14ma settimana, e serve per calcolare il rischio che il feto sia affetto da anomalie cromosomiche, in primo luogo la trisomia 21 (la sindrome di Down), che è la più frequente, oltre alla trisomia 13 e la 18.

I dati che emergono dalla translucenza nucale e dal duo-test vengono elaborati da un software specifico in combinazione con l’età materna (è ormai provato, infatti, che più aumenta l’età materna, maggiori sono le probabilità di concepire un figlio affetto da sindrome di Down), la lunghezza del feto e l’epoca gestazionale.

La sensibilità del test combinato, ossia la capacità di individuare le gravidanze a rischio di anomalie cromosomiche, è del 90-95%, a patto che venga eseguito da personale specializzato.

Translucenza Nucale (TN)

Per translucenza nucale si intende la misura della falda liquida che si accumula dietro la nuca del feto: più è basso questo valore, minore è la probabilità di malformazioni, viceversa più spessa è la TN, maggiori sono le probabilità che il feto sia affetto da Sindrome di Down o altre anomalie.

Duo-Test

Il duo test è un test di screening biochimico di recente acquisizione, basato sul prelievo di un piccolo campione di sangue materno in cui si vanno a dosare due sostanze di origine placentare, rispettivamente chiamate β-HCG (frazione beta libera della gonadotropina corionica) e PAPP-A (proteina plasmatica A associata alla gravidanza).

I due valori sono inversamente proporzionali, cioè se la PAPP-A diminuisce, la free b-hCG aumenta, e più questi valori si discostano tra loro, maggiore è il rischio di anomalie. I risultati dei dosaggi vengono espressi in Multipli della Mediana (la sigla è Mom), mediante un calcolo che ha lo scopo di eliminare le differenze di unità o di metodi di misurazione che vengono utilizzati dai singoli operatori o dai singoli Centri che eseguono l’esame.

Esami Invasivi

Si tratta di metodiche invasive che comportano un rischio per la salute della mamma e del bambino, ma che al tempo stesso hanno delle limitazioni.

VILLOCENTESI

Si tratta di una metodica invasiva che viene eseguita tra la 10°e la 12° settimana di gravidanza, mediante la quale, per via trans addominale, sotto guida ecografica, viene prelevata una piccola quantità di villi coriali, ovvero la parte embrionale della futura placenta, dai quali poi viene effettuata l’analisi del cariotipo e, se richiesto, anche l’analisi molecolare per specifica malattia genetica. La tecnica ha un rischio di perdita fetale stimato intorno al 1%.

Per l’analisi standard del cariotipo i villi vengono sia analizzati direttamente (analisi diretta, con referto in 5 giorni) che messi in coltura (coltura a lungo termine, con referto in 20 giorni). Molti centri che offrono la villocentesi affiancano ad essa la QF-PCR, una diversa metodica di studio, che permette di dare una risposta in 2 giorni.

AMNIOCENTESI

Si tratta di una metodica invasiva che viene eseguita intorno alla 16° settimana di gestazione. Si esegue per via trans addominale, sotto guida ecografica, viene prelevata una piccola quantità di liquido amniotico, sul quale viene effettuata l’analisi del cariotipo e, se richiesto, anche l’analisi molecolare per specifica malattia genetica. La tecnica ha un rischio di perdita fetale stimato intorno allo 0,5%.

Per l’analisi standard del cariotipo gli amniociti (cellule del liquido amniotico) vengono messe in coltura e analizzate dopo almeno 2 settimane (per cui si può avere un referto in 20 giorni). Molti centri che offrono l’amniocentesi affiancano ad essa la QF-PCR con referto in 2 giorni.

CORDOCENTESI

Si tratta di una metodica invasiva che viene eseguita, solo per indicazione specifica, intorno alla 18°-20° settimana di gestazione, o anche più tardivamente, mediante la quale, per via trans addominale, sotto guida ecografica, viene prelevata una piccola quantità di sangue fetale dai vasi del cordone ombelicale, sul quale vengono effettuate le specifiche analisi di conferma che hanno richiesto il ricorso a questa tecnica. La tecnica ha un rischio di perdita fetale stimato intorno all’ 1% se la procedura viene effettuata dopo le 20 - 22 settimane, mentre è più rischiosa se si interviene a 16-18 settimane. Non tutti i Centri eseguono tale procedura poiché richiede grande esperienza e manualità per minimizzare i rischi.

Sul sangue fetale è possibile eseguire le stesse analisi dell’età post-natale, inclusi gli esami infettivologici.

Analisi del Patrimonio Cromosomico

Gli esami che vengono utilizzati per studiare il patrimonio cromosomico, sono il cariotipo standard, il QF-PCR e il CGH-array.

CARIOTIPO STANDARD

L’analisi del cariotipo (o anche detta mappa cromosomica) consente di visualizzare dal punto di vista numerico, morfologico e strutturale i 46 cromosomi. L’analisi si esegue sia villi coriali che su amniociti, e può essere sia diretta, provvisoria (mediante l’analisi di cellule analizzabili presenti nel campione a fresco; tempo di refertazione 3-5 giorni), che dopo coltura a lungo termine (possibilità di conta molte cellule, con certezza del risultato conclusivo; tempo di refertazione medio 21 giorni).

QF-PCR

L’analisi eseguita mediante tecnica di PCR quantitativa fluorescente (QF-PCR), ovvero l’analisi dei 5 cromosomi (13, 18, 21, X, Y) maggiormente coinvolti nelle anomalie cromosomiche da età materna avanzata, può essere eseguita sia su villi coriali che su amniocentesi, ed in genere viene proposta in abbinamento alla tecnica standard, per fornire rapidamente (in 2 giorni) un risultato parziale seguito poi da quello definitivo dopo 21 giorni.

CGH-ARRAY

L’analisi in CGH-array consente di eseguire un cariotipo molecolare completo in 3 giorni, sia su villi che su amniociti, con una definizione circa 100 volte superiore al cariotipo standard. Il referto è conclusivo. Consente di individuare le alterazioni cromosomiche di numero e di struttura (sbilanciate, e dunque patologiche) e le piccole delezioni e duplicazioni (un centinaio delle quali coinvolte in sindromi genetiche malformative o con ritardo psicomotorio).

Analisi Malattie Monogeniche

Sia su villi coriali che su amniociti è possibile eseguire l’analisi di singole malattie monogeniche. La procedura corretta prevede che tali analisi vengano eseguite su indicazione specifica (malattia familiare, status di portatore dei genitori, sospetto ecografico preciso) dopo aver caratterizzato i genitori dal punto di vista molecolare in epoca pre-natale.

Eseguire o meno un test di screening oppure un test diagnostico è una scelta che la donna fa dopo essere stata adeguatamente informata sulle potenzialità e sui limiti del test proposto.

Tabella Comparativa dei Test Prenatali

Test	Tipo	Periodo di Esecuzione	Attendibilità	Rischio di Perdita Fetale	Informazioni Fornite
Test DNA Fetale	Non Invasivo	12°-14° settimana	>99%	Nessuno	Trisomia 21, 18, 13
Test Combinato	Non Invasivo	11°-14° settimana	90-95%	Nessuno	Rischio di anomalie cromosomiche
Vilocentesi	Invasivo	10°-12° settimana	Alto	Circa 1%	Analisi del cariotipo e malattie genetiche
Amniocentesi	Invasivo	Intorno alla 16° settimana	Alto	Circa 0.5%	Analisi del cariotipo e malattie genetiche
Cordocentesi	Invasivo	18°-20° settimana	Alto	Circa 1%	Analisi del cariotipo e malattie genetiche